V prvom rade potrebujeme vedieť, prečo stále viac a viac spoločností má tendenciu zmraziť rôzne bielkoviny, pretože stabilita bielkovín v stave suchého prášku je vyššia a je ľahšie prepravovať a skladovať tekuté činidlá, takže sušenie zmrazenia bielkovín sa stalo veľkým trendom AA.
Najbežnejšie používanou metódou na zmenu z tekutých činidiel na suché prášky je vysušenie vákua s nízkym teplotou, aby sa odstránili vlhkosť za vzniku suchých práškov. V tomto nízkoteplotnom prostredí sa proteínová štruktúra ľahko mení, čo môže ovplyvniť funkciu proteínu, takže je potrebné sušenie zmrazenia. Pre tých, ktorí majú ochranné činidlá, budú funkcie rôznych typov ochranných činidiel odlišné.
Zhrňte, aké sú bežne používané ochranné činidlá sušenia zmrazenia? Hlavne rozdelené do piatich kategórií:
1. PH pufri, stabilita proteínu je výrazne ovplyvnená pH, pri výbere pufra s vysokým pH, snažte sa nepriblížiť izoelektrickému bodu proteínu, aby sa predišlo agregácii proteínu, Tris, histidín a citrát sa počas procesu sušenia zmrazí, bude mať malá zmena pH a pH BuffR riešenia je všeobecne 5.
2. Plniace činidlo, aby sa zabezpečilo, že produkt sušený zmrazenými tvorí dobrú štruktúru, aby sa zabránilo zrúteniu produktu, a tiež na zvýšenie rozpustnosti vzorca, musí byť plniace činidlo plne rozpustné a kompatibilné s proteínom. Bežne používaným náplnkovým činidlom je manna alkohol, glycín, hovädzí sérumový albumín atď.
3. Cukry, cukry sú excipienty v procese sušenia proteínového zmrazenia, pretože cukry obsahujú viac hydroxylových skupín, ktoré môžu nahradiť vodíkové väzby medzi proteínmi a vodou, aby sa zabezpečila stabilita, všeobecne disacharidy, ako je sacharóza a trehalóza.
Po štvrté, neiónové povrchovo aktívne látky môžu redukovať agregáciu bielkovín, najbežnejšie používané je Tween 80.
5. Ligandy, niekedy sa pridávajú niektoré ligandy na zlepšenie termodynamickej stability proteínu.